超微量分光光度計應(yīng)用于生命科學(xué)的具體領(lǐng)域分析

　　超微量分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器，主要設(shè)計用于生命科學(xué)實驗室蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)下述應(yīng)用領(lǐng)域：

　　

　　一、核酸的定量

　　

　　核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長260nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。

　　

　　定量不同類型的核酸，事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如：1OD的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。

　　

　　測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測試空白液和樣品液。然而，實驗并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實驗者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。

　　

　　二、蛋白質(zhì)的直接定量（UV法）

　　

　　這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg公式，超微量分光光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。

　　

　　蛋白質(zhì)測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要消除320nm的“背景”信息，設(shè)定此功能“開”。與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，線性范圍在1.0-1.5之間。

　　

　　三、比色法蛋白質(zhì)定量

　　

　　蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物，比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。

　　

　　四、細菌細胞密度

　　

　　實驗室確定細菌生長密度和生長期，多根據(jù)經(jīng)驗和目測推斷細菌的生長密度。在遇到要求較高的實驗，需要采用超微量分光光度計準(zhǔn)確測定細菌細胞密度。細菌細胞密度是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法。